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LAMP技术

什么是LAMP?

“LAMP”(环介导等温扩增,Loop-mediated Isothermal Amplification)是一种由栄研化学株式会社独自开发的简单、快速、高特异性且成本低廉的核酸扩增方法。

其特点是使用4种不同的引物,专门设计用于识别目标基因的6个特定区域,反应过程在恒温下通过链置换反应进行。基因的扩增和检测可以在单一步骤中完成——将样品、引物、具有链置换活性的DNA聚合酶及底物混合后,在恒定温度(约65°C)下孵育即可。

该方法具有高扩增效率,DNA可在15至60分钟内扩增至10^9–10^10倍。由于其高度特异性,扩增产物的存在即可指示目标基因的存在。

LAMP技术

如何设计引物?

根据目标基因的以下6个特定区域设计4种类型的引物:

3’ 端区域:F3c、F2c 和 F1c

5’ 端区域:B1、B2 和 B3

有关引物、LAMP 原理及技术信息的更多内容,请参阅 Eiken Genome 网站

https://primerexplorer.eiken.co.jp/e/)

每个引物区域可以通过使用 PrimerExplore(LAMP 引物设计专用软件)确定,在设计时需考虑碱基组成、GC 含量以及二级结构的形成。引物的熔解温度(Tm)可通过 Nearest Neighbor 方法计算得到。

LAMP技术